Ülevaade

Tehke oma isiklik pGreenFire 2.zero reportervektor või kasutage seda halva haldusena

Tänu pGreenFire 2.zero mCMV kloonimisele ja ebasoodsale juhtimisele ja viirusele (pGF2-mCMV-rFluc-T2A-GFP-mPGK-Puro) saate maksimaalselt kasutada meie tugevat pGreenFire 2.zero lentivector oskusteavet, et luua oma isiklik transkriptsioonivastuse komponendi (TRE) reporterit või kasutage kahjuliku haldusena pGreenFire 2.zero mCMV.

PGreenFire 2.zero mCMV kloonimise ja ebasoodsa juhtimise lektoriga on XhoI ja NheI veebisaidid paigutatud minimaalse CMV promootori (mCMV) eelvoolu, nii et saate kloonida oma isiklikesse TRE -desse. Aktiveerimisel juhivad TRE-d ja mCMV promootor ühiselt karmiinpunase lillesiferaasi ja GFP koosekspressiooni, nii et saate kvantitatiivselt mõõta transkriptsioonilist harjutust, kasutades iga fluorestsents- ja lutsiferaasiharjutust.

Teise võimalusena peate kasutama vektorit kahjuliku haldusena iga ettevõtja jaoks, kes kasutab pGreenFire 2.zero lentivectorsi (vt teavet allpool).

Mis muudab meie järgmise põlvkonna pGreenFire 2.zero vektorid isegi kõrgemaks kui erinevad TRE reportervektorid, on hea disain, mis pakub konstantse valiku kassetti stabiilse rakuliini ajastu jaoks, minimeerides samas häireid ülesvoolu TRE-s. Kasutades nõrka/mõistlikku mPGK promootorit antibiootikumide valiku markeri (puromütsiiniresistentsus) juhtimiseks ja tingimuslike reportergeenide põhjalikku korraldamist, väljendatakse valikumarkerit usaldusväärselt ilma rFLuc ja GFP kahjustava tingimusliku ekspressioonita.

UUE TOOTE HOIATUS!

SBI töötab välja, et teatada meie järgneva ajastu pGreenFire signaaliraja reporterite käivitamisest! Oleme täiustanud neid standardseid laenuvõtjaid intelligentse disainiga, mis võimaldab usaldusväärset rakujälgede ajastu, ning oleme lisaks muutnud traditsioonilist lutsiferaasi reporterit karmiinpunase lillesiferaasiga, mis avab kahespektrilise lutsiferaasi testi teostamise potentsiaali ja suurendab tundlikkust  in vivo  funktsioone kui tüüpiline lutsiferaas.

pGreenFire põhialused

Neile, kes pole meie pGreenFire reporteritega tuttavad, on kõigil 1. nullil ja paaril nullil analoogne põhitulemus- transkriptsioonivastuse osad (TRE) on paigutatud minimaalse CMV promootori (mCMV) ja pGreenFire lutsiferaasi- T2A-GFP koekspressioonikassett. Transkriptsiooni aktiveerimise puudumisel on mCMV promootoril tühine treening, mis põhjustab vähese või nutsutsiferaasi kasutamise või GFP fluorestsentsi (1. määramine). Sellegipoolest, TRE-de aktiveerimisel, mis vastab vastuseks indutseerija lisamisele, juhivad TRE-d pluss mCMV promootor iga lutsiferaasi ja GFP ekspressiooni annusest sõltuvas trendis (1. määramine). Tulemuseks on paindlikkus raja aktiveerimise kvantitatiivseks mõõtmiseks, kasutades lutsiferaasi või GFP -d.

Nagu kõigi meie pGreenFire 2.zero lentivektorite puhul, koosneb ka GreenFire kassett nüüd karmiinpunase tulekese lutsiferaasist (rFLuc), T2A koekspressioonikomponendist ja GFP-st. Üleminek rFLuc-le avab kahespektrilise lutsiferaasi testi teostamise potentsiaali ja annab samuti suurema tundlikkuse  in vivo  funktsioonide suhtes kui tüüpiline lutsiferaas.